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菌種保藏的方法有哪些濾紙保藏法和沙土保藏法哪個(gè)更好

來(lái)源：互聯(lián)網(wǎng) 　2023-06-26 13:58:59

(資料圖)

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沙土保藏法取河沙加入10%稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘，以去除其中的有機(jī)質(zhì)倒去酸水，用自來(lái)水沖洗至中性烘干，用40目篩子過(guò)篩，以去掉粗顆粒，備用另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土，加自來(lái)水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性烘干，碾碎，通過(guò)100目篩子過(guò)篩，以去除粗顆粒，我來(lái)為大家科普一下關(guān)于菌種保藏的方法?以下內(nèi)容希望對(duì)你有幫助!

菌種保藏的方法

沙土保藏法。取河沙加入10%稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘，以去除其中的有機(jī)質(zhì)。倒去酸水，用自來(lái)水沖洗至中性。烘干，用40目篩子過(guò)篩，以去掉粗顆粒，備用。另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土，加自來(lái)水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性。烘干，碾碎，通過(guò)100目篩子過(guò)篩，以去除粗顆粒。

濾紙保藏法。將濾紙剪成0.5×1.2cm的小條，裝入0.6×8cm的安瓿管中，每管1-2張，塞以棉塞，1.05 kg/cm，121℃滅菌30分鐘。將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長(zhǎng)。取滅菌脫脂牛乳1-2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液。用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內(nèi)，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。將安瓿管放入內(nèi)有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。將棉花塞入管內(nèi)，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存于低溫下。需要使用菌種，復(fù)活培養(yǎng)時(shí)，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開(kāi)啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14-17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡(jiǎn)便，不需要特殊設(shè)備。

寄主保藏法。寄主保藏法用于尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲(chóng)、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。冷凍保藏法可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法，其中最常見(jiàn)的是甘油管冷凍保藏法。

甘油管保存法。甘油管冷凍保藏法是利用微生物在甘油中生長(zhǎng)和代謝受到抑制的原理達(dá)到保藏目的。其方法是將80%的甘油高壓蒸汽滅菌待用。將培養(yǎng)好的斜面菌種用無(wú)菌水制成高濃度的菌懸液。取1ml滅菌甘油放入與菌液充分混勻，使甘油濃度約為10%-30%，于-70℃下凍存。-20℃保存時(shí)間較短。或采用體積比為8：2的甘油-生理鹽水，加入新鮮培養(yǎng)的菌體肉湯，混合均勻后至-20℃冰箱保存。該方法適用于一般細(xì)菌的保存，同時(shí)也適用于鏈球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌種，適用范圍廣，操作簡(jiǎn)便，效果好，無(wú)變異現(xiàn)象發(fā)生。甘油-生理鹽水保存液保存菌種優(yōu)于甘油原液，其原因可能是加入生理鹽水適當(dāng)降低了甘油的高滲作用，且有肉湯培養(yǎng)物適量增加保存液的營(yíng)養(yǎng)成分，從而更好地保護(hù)了待保存的菌株。

冷凍干燥保藏法。先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥），其中真空冷凍干燥法最常見(jiàn)。真空冷凍干燥保藏法是兼具低溫、干燥、除氧三方面菌種保藏的主要因素，除不宜于絲狀真菌的菌絲體外，對(duì)病毒、細(xì)菌、放線菌、酵母及絲狀菌孢子等各類微生物都適用，不宜用凍干法保存的微生物不到2%。真空冷凍干燥法是在低溫下快速將細(xì)胞凍結(jié)，然后在真空條件下干燥，使微生物的生長(zhǎng)和酶活動(dòng)停止。為了防止在冷凍和水分升華過(guò)程中對(duì)細(xì)胞的損害，要采用保護(hù)劑來(lái)制備細(xì)胞懸液，使菌在凍結(jié)和脫水過(guò)程中起到保護(hù)作用的溶質(zhì)，通過(guò)氫鍵和離子鍵對(duì)水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來(lái)穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。即是使樣品中的水分在冰凍狀態(tài)下，抽真空減壓，使凍結(jié)的冰直接升華為水蒸氣，使樣品達(dá)到干燥。干燥后的微生物在真空下封裝，與空氣隔絕，達(dá)到長(zhǎng)期保藏的目的。

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